
您的位置:網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)全自動(dòng)生化檢測(cè)|茁彩生物 在人體肝臟功能評(píng)估與能量代謝監(jiān)測(cè)體系中,谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是一項(xiàng)核心的酶類指標(biāo)。它廣泛存在于人體多個(gè)組織器官,尤其在肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞內(nèi)活性非常高,不僅是參與人體氨基酸代謝與能量轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵酶,更因 “對(duì)細(xì)胞損傷高度敏感" 的特性,成為早期發(fā)現(xiàn)肝臟疾病、心肌損傷的重要 “預(yù)警信號(hào)"。
谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate Aminotransferase,簡(jiǎn)稱 AST,舊稱天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶),是一種催化天冬氨酸與 α- 酮戊二酸之間氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)的水解酶,化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì),其活性依賴于磷酸吡哆醛(維生素 B6 的活性形式)作為輔酶。該酶在人體組織中分布廣泛,但具有顯著的組織濃度差異 ——以肝細(xì)胞和心肌細(xì)胞內(nèi)含量最高,其次為骨骼肌細(xì)胞、腎臟細(xì)胞、胰腺細(xì)胞等,而在血液中活性極低。
從組織分布細(xì)節(jié)來看:
肝臟:AST 主要存在于肝細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中(約占肝細(xì)胞內(nèi) AST 總量的 80%),少量存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí),細(xì)胞質(zhì)中的 AST 會(huì)首先釋放入血,若損傷進(jìn)一步加重(如肝細(xì)胞壞死),線粒體中的 AST 會(huì)大量釋放,導(dǎo)致血液中 AST 活性顯著升高;
心臟:心肌細(xì)胞內(nèi) AST 活性僅次于肝細(xì)胞,且同樣主要存在于線粒體中。當(dāng)發(fā)生心肌梗死、心肌炎等疾病時(shí),心肌細(xì)胞破裂,AST 會(huì)快速釋放入血,成為診斷心肌損傷的重要指標(biāo)之一;
其他組織:骨骼肌細(xì)胞(如肌肉損傷、劇烈運(yùn)動(dòng)后)、腎臟細(xì)胞(如急性腎炎、腎衰竭)受損時(shí),也會(huì)導(dǎo)致少量 AST 釋放入血,但通常升高幅度低于肝臟或心臟疾病。
正常生理狀態(tài)下,血清 AST 活性維持在較低水平,成人血清 AST 正常參考范圍約為 8-40U/L(不同檢測(cè)方法或?qū)嶒?yàn)室可能略有波動(dòng)),且無明顯性別差異。當(dāng)肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞等組織細(xì)胞受損時(shí),細(xì)胞內(nèi)的 AST 會(huì)大量釋放入血,導(dǎo)致血清 AST 活性升高,且升高幅度通常與細(xì)胞損傷程度呈正相關(guān)。
生理功能
AST 的核心生理功能圍繞 “氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)" 展開,該反應(yīng)是人體氨基酸代謝與能量代謝的關(guān)鍵環(huán)節(jié),同時(shí)為蛋白質(zhì)合成、尿素生成等重要生理過程提供原料,具體體現(xiàn)在以下方面:
(一)參與氨基酸代謝,促進(jìn)氨基轉(zhuǎn)移與再利用
AST 催化的核心反應(yīng)是 “天冬氨酸 -α- 酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)",即天冬氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至 α- 酮戊二酸分子上,生成草酰乙酸和谷氨酸,反應(yīng)式為:
天冬氨酸 + α- 酮戊二酸 ?[AST / 磷酸吡哆醛] 草酰乙酸 + 谷氨酸
這一反應(yīng)具有可逆性,在不同組織器官中可根據(jù)代謝需求調(diào)整反應(yīng)方向,實(shí)現(xiàn)氨基的 “轉(zhuǎn)運(yùn)" 與 “再利用":
氨基回收:當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分解產(chǎn)生多余氨基酸時(shí),AST 可將氨基酸的氨基轉(zhuǎn)移至 α- 酮戊二酸生成谷氨酸,谷氨酸再通過其他酶的作用將氨基轉(zhuǎn)移至尿素合成途徑(在肝臟中),最終生成尿素排出體外,避免氨基在體內(nèi)蓄積;
氨基酸合成:當(dāng)機(jī)體需要合成特定氨基酸時(shí),AST 可反向催化反應(yīng),將谷氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至草酰乙酸,生成天冬氨酸,為蛋白質(zhì)合成(如肝細(xì)胞合成白蛋白、凝血因子,心肌細(xì)胞合成結(jié)構(gòu)蛋白)提供原料,維持組織器官的結(jié)構(gòu)與功能。
(二)鏈接糖代謝與氨基酸代謝,參與能量轉(zhuǎn)換
AST 催化生成的草酰乙酸和谷氨酸,是連接氨基酸代謝與糖代謝的 “關(guān)鍵橋梁",間接參與人體能量轉(zhuǎn)換過程:
草酰乙酸的糖代謝途徑:反應(yīng)生成的草酰乙酸可通過 “糖異生作用"(主要在肝臟、腎臟中)轉(zhuǎn)化為葡萄糖,為血糖穩(wěn)定提供保障;也可進(jìn)入 “三羧酸循環(huán)"(細(xì)胞線粒體中),與乙酰輔酶 A 結(jié)合生成檸檬酸,進(jìn)一步分解產(chǎn)生 ATP(細(xì)胞可直接利用的能量載體),為細(xì)胞活動(dòng)供能;
谷氨酸的能量代謝作用:谷氨酸可通過 “谷氨酸脫氫酶" 的催化作用,生成 α- 酮戊二酸,α- 酮戊二酸同樣是三羧酸循環(huán)的重要中間產(chǎn)物,可直接參與循環(huán)過程產(chǎn)生能量。尤其在心肌細(xì)胞中,AST 催化生成的代謝產(chǎn)物能快速進(jìn)入三羧酸循環(huán),為心肌收縮提供能量,維持心臟正常泵血功能。
(三)輔助肝臟解毒與尿素合成,維持代謝穩(wěn)態(tài)
肝臟是人體主要的解毒器官和尿素合成場(chǎng)所,AST 通過參與氨基酸代謝,為肝臟的解毒功能與尿素合成提供關(guān)鍵支持:
解毒輔助作用:AST 催化生成的谷氨酸,可與肝臟內(nèi)的有毒物質(zhì)(如重金屬離子、藥物代謝產(chǎn)物)結(jié)合,形成無毒或低毒的復(fù)合物,隨后通過腎臟排出體外,增強(qiáng)肝臟的解毒能力;同時(shí),谷氨酸還能與乙醛(酒精代謝的有毒中間產(chǎn)物)結(jié)合,減少乙醛對(duì)肝細(xì)胞的損傷,間接保護(hù)肝臟功能;
尿素合成原料供應(yīng):尿素合成的關(guān)鍵步驟 “鳥氨酸循環(huán)" 中,需要天冬氨酸提供氨基 ——AST 催化生成的天冬氨酸,可直接參與鳥氨酸循環(huán),與瓜氨酸結(jié)合生成精氨酸代琥珀酸,最終轉(zhuǎn)化為尿素和精氨酸,確保體內(nèi)多余的氨(蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物,有毒性)能及時(shí)轉(zhuǎn)化為尿素排出,維持血液氨濃度穩(wěn)定,避免肝性腦病等嚴(yán)重并發(fā)癥。
(四)作為組織損傷的特異性診斷標(biāo)志物(間接生理意義延伸)
盡管 AST 的核心功能是參與代謝,但由于其在肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞內(nèi)的高濃度分布,血清 AST 活性變化已成為臨床診斷組織損傷的重要依據(jù),這一 “診斷價(jià)值" 可視為其生理功能的間接延伸:
肝臟疾病診斷:當(dāng)發(fā)生急性病毒性肝炎、酒精性肝炎、肝硬化、肝癌等疾病時(shí),肝細(xì)胞受損破裂,AST 釋放入血,血清 AST 活性升高,且升高幅度與肝細(xì)胞壞死程度相關(guān)(如急性重癥肝炎時(shí),AST 可升高至正常上限的 10-100 倍);同時(shí),結(jié)合谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的比值(AST/ALT),可進(jìn)一步判斷肝臟損傷類型(如酒精性肝病時(shí) AST/ALT>2,病毒性肝炎時(shí) AST/ALT<1);
心肌損傷診斷:急性心肌梗死發(fā)生后,心肌細(xì)胞在 6-12 小時(shí)內(nèi)開始破裂,AST 會(huì)快速釋放入血,24-48 小時(shí)達(dá)到峰值,隨后逐漸下降,因此 AST 可作為急性心肌梗死的早期診斷指標(biāo)之一(需結(jié)合肌鈣蛋白、肌酸激酶等指標(biāo)綜合判斷);此外,心肌炎、心包炎等疾病也會(huì)導(dǎo)致 AST 輕度升高;
其他組織損傷監(jiān)測(cè):劇烈運(yùn)動(dòng)(導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞輕微損傷)、肌肉拉傷、急性腎炎等情況,也可能引起血清 AST 輕度升高,但通常伴隨特異性癥狀(如肌肉疼痛、尿液異常),可通過臨床癥狀與其他指標(biāo)鑒別。
茁彩生物依托專業(yè)的檢測(cè)技術(shù)平臺(tái),采用全自動(dòng)生化儀開展 AST 檢測(cè),通過標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)流程、先進(jìn)的儀器性能及嚴(yán)格的質(zhì)量控制,確保檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性、時(shí)效性與可靠性,為科研工作提供有力支持。
(一)檢測(cè)原理
茁彩生物使用的全自動(dòng)生化儀檢測(cè) AST 活性,主要基于連續(xù)監(jiān)測(cè)法(速率法),該方法是目前臨床應(yīng)用*廣泛、準(zhǔn)確性最高的 AST 檢測(cè)方法,核心原理是通過檢測(cè) AST 催化特異性底物反應(yīng)過程中產(chǎn)物的生成速率,間接計(jì)算酶的活性(單位:U/L),具體反應(yīng)體系與檢測(cè)過程如下:
1. 反應(yīng)體系設(shè)計(jì)
檢測(cè)試劑中包含 AST 的特異性底物(天冬氨酸和 α- 酮戊二酸)、輔酶(磷酸吡哆醛,激活 AST 活性)、指示酶(蘋果酸脫氫酶 MDH 和乳酸脫氫酶 LDH,部分試劑僅用 MDH)、還原型輔酶 Ⅰ(NADH)及緩沖液(維持反應(yīng)體系 pH 在 7.3-7.8 的適宜范圍)。其中,天冬氨酸和 α- 酮戊二酸是 AST 催化反應(yīng)的直接底物,NADH 的吸光度變化是檢測(cè)的核心信號(hào)來源。
2. 反應(yīng)過程
第一步:AST 催化反應(yīng):樣本中的 AST 催化底物天冬氨酸與 α- 酮戊二酸發(fā)生氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng),生成草酰乙酸和谷氨酸;
第二步:指示酶反應(yīng):生成的草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶(MDH)的催化下,與還原型輔酶 Ⅰ(NADH)反應(yīng),生成蘋果酸和氧化型輔酶 Ⅰ(NAD?),反應(yīng)式為:
草酰乙酸 + NADH + H? →[MDH] 蘋果酸 + NAD?
第三步:信號(hào)檢測(cè)與活性計(jì)算:還原型輔酶 Ⅰ(NADH)在特定波長(340nm)下具有較強(qiáng)的吸光度,而氧化型輔酶 Ⅰ(NAD?)在此波長下吸光度極低。隨著反應(yīng)的進(jìn)行,NADH 不斷被消耗,樣本在 340nm 處的吸光度會(huì)隨時(shí)間線性下降,吸光度下降速率與樣本中 AST 的活性呈正比。全自動(dòng)生化儀通過連續(xù)監(jiān)測(cè)(通常監(jiān)測(cè) 3-5 分鐘)吸光度下降速率(ΔA/min),結(jié)合 NADH 的摩爾吸光系數(shù)、反應(yīng)體系體積等參數(shù),根據(jù)公式自動(dòng)計(jì)算出樣本中 AST 的活性(U/L)—— 吸光度下降速率越快,說明樣本中 AST 活性越高。
為進(jìn)一步減少干擾,部分檢測(cè)試劑中還會(huì)添加抑制劑(如 EDTA,抑制樣本中金屬離子對(duì)酶活性的影響)、抗氧化劑(如抗壞血酸氧化酶,清除維生素 C 對(duì) NADH 吸光度的干擾),確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(二)檢測(cè)優(yōu)勢(shì)
茁彩生物采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè) AST 活性,相比傳統(tǒng)手工檢測(cè)(如比色法)或半自動(dòng)化儀器,具有顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì),具體體現(xiàn)在以下四個(gè)方面:
1. 檢測(cè)準(zhǔn)確性高,結(jié)果可靠
特異性強(qiáng):連續(xù)監(jiān)測(cè)法使用天冬氨酸和 α- 酮戊二酸作為特異性底物,僅 AST 能高效催化其氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng),有效排除樣本中乳酸脫氫酶(LDH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、膽紅素、維生素 C 等干擾物質(zhì)的影響;試劑中添加的抑制劑和抗氧化劑進(jìn)一步降低了干擾風(fēng)險(xiǎn),避免假陽性或假陰性結(jié)果;
精準(zhǔn)度高:全自動(dòng)生化儀配備高精度的光學(xué)系統(tǒng)(如全息光柵分光光度計(jì))和溫度控制系統(tǒng)(反應(yīng)溫度恒定在 37℃,波動(dòng)范圍 ±0.1℃),可精準(zhǔn)監(jiān)測(cè) 340nm 處的吸光度變化,最小檢測(cè)誤差≤1%;同時(shí),儀器支持多點(diǎn)校準(zhǔn)(通常設(shè)置 5-7 個(gè)濃度點(diǎn)的 AST 標(biāo)準(zhǔn)品),確保檢測(cè)結(jié)果在寬線性范圍內(nèi)(通常為 5-1000U/L)的準(zhǔn)確性,即使對(duì)于急性重癥肝炎或心肌梗死患者的高活性樣本(AST>800U/L),也無需稀釋即可直接檢測(cè);
質(zhì)量控制嚴(yán)格:茁彩生物建立了完善的質(zhì)量控制體系,每日檢測(cè)前使用國際標(biāo)準(zhǔn)品(如 WHO 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或 Sigma 公司的 AST 標(biāo)準(zhǔn)品)校準(zhǔn)儀器,檢測(cè)過程中插入高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控品(覆蓋臨床常見范圍,如低濃度 20U/L、中濃度 50U/L、高濃度 300U/L),實(shí)時(shí)監(jiān)控檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性;每月還會(huì)參與全國臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評(píng),確保檢測(cè)結(jié)果與全國主流實(shí)驗(yàn)室的一致性,為醫(yī)生診斷肝臟疾病、心肌損傷提供可靠數(shù)據(jù)依據(jù)。
2. 檢測(cè)速度快,滿足批量需求
自動(dòng)化流水線操作:全自動(dòng)生化儀可實(shí)現(xiàn)樣本的 “一鍵式" 處理 —— 操作人員只需將待檢測(cè)的血清樣本加載到樣本架上,設(shè)置檢測(cè)項(xiàng)目后,儀器自動(dòng)完成樣本吸取、試劑添加、反應(yīng)孵育、吸光度監(jiān)測(cè)、結(jié)果計(jì)算及報(bào)告生成,無需人工干預(yù);
高效處理能力:?jiǎn)闻_(tái)儀器每小時(shí)可處理 300-600 個(gè)樣本,單個(gè)樣本的檢測(cè)時(shí)間僅需 3-5 分鐘,遠(yuǎn)快于傳統(tǒng)手工檢測(cè)(手工檢測(cè)單個(gè)樣本需 20-30 分鐘);對(duì)于醫(yī)院肝病科、心內(nèi)科(大量肝臟疾病或心血管疾病患者樣本)、體檢中心(批量篩查肝功能)等場(chǎng)景,能夠快速完成檢測(cè)任務(wù),大幅縮短報(bào)告出具時(shí)間;
3. 操作簡(jiǎn)便,降低人為誤差
標(biāo)準(zhǔn)化操作流程:儀器內(nèi)置成熟的檢測(cè)程序(已預(yù)設(shè)連續(xù)監(jiān)測(cè)法的反應(yīng)參數(shù),如反應(yīng)時(shí)間、溫度、試劑添加量、波長選擇),操作人員無需手動(dòng)配制復(fù)雜試劑(試劑為商品化的即用型液體試劑,包含底物、輔酶、指示酶等所有成分)或調(diào)整反應(yīng)條件,僅需進(jìn)行樣本加載和參數(shù)確認(rèn),大幅降低操作復(fù)雜度;
智能誤差控制:儀器具備多種異常預(yù)警功能,如樣本量不足、試劑過期、樣本溶血 / 脂血 / 黃疸(會(huì)影響 340nm 處吸光度檢測(cè))、反應(yīng)溫度異常等情況,會(huì)實(shí)時(shí)發(fā)出警報(bào)并提示原因,操作人員可及時(shí)處理(如重新采集樣本、更換試劑),避免因操作失誤或樣本問題導(dǎo)致的檢測(cè)誤差;
人員依賴度低:即使是非專業(yè)檢驗(yàn)人員,經(jīng)過 1 小時(shí)的簡(jiǎn)單培訓(xùn)(掌握樣本加載、儀器啟動(dòng)、結(jié)果查看及常見警報(bào)處理),也能熟練使用儀器,確保不同操作人員、不同檢測(cè)批次的結(jié)果一致性,尤其適合基層醫(yī)院、體檢中心等場(chǎng)景的批量檢測(cè)需求。
此外,全自動(dòng)生化儀可同時(shí)開展多個(gè)肝功能或心肌損傷相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)(如同時(shí)檢測(cè) AST、ALT、膽紅素、白蛋白、肌鈣蛋白等),形成 “肝功能全套套餐" 或 “心肌損傷篩查套餐",為客戶提供一站式檢測(cè)服務(wù)。例如,同時(shí)檢測(cè) AST 與 ALT,可全面評(píng)估肝細(xì)胞損傷程度;同時(shí)檢測(cè) AST 與肌鈣蛋白,可快速鑒別肝臟疾病與心肌損傷,提高診斷的精準(zhǔn)性。
通過全自動(dòng)生化儀檢測(cè)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性,茁彩生物能夠科研機(jī)構(gòu)等客戶提供高質(zhì)量的檢測(cè)服務(wù)。
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